注意：因业务调整，暂不接受个人委托测试，望谅解(高校、研究所等性质的个人委托除外)。

因篇幅原因，CMA/CNAS/ISO证书以及未列出的项目/样品，请咨询在线工程师。

CLSI M24检测

文章简介

临床与实验室标准协会文件M24，全称为《需氧菌的稀释法药敏试验和质控：第三版》，是临床微生物实验室进行需氧菌药物敏感性试验的核心指导文件。本检测严格遵循其规范，旨在通过标准化的操作方法，准确测定抗菌药物对需氧菌的最低抑菌浓度，为临床抗感染治疗提供关键依据。检测要点涵盖菌液制备、培养基选择、药物稀释、接种孵育及结果判读的全流程质量控制，确保试验结果的准确性、可重复性与临床相关性，是评估细菌耐药性和指导合理用药的重要技术基础。

检测项目

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1. 最低抑菌浓度测定：针对各类需氧菌，系统测定其对指定抗菌药物的最低抑菌浓度，这是药敏试验的核心定量指标。

2. 敏感、中介与耐药判定：根据测得的最低抑菌浓度值，参照临床与实验室标准协会制定的最新折点标准，对受试菌株的药物敏感性进行定性分类，明确其属于敏感、中介或耐药。

3. 质量控制试验：使用标准质控菌株，在每次试验或每日进行平行检测，以监控培养基、抗菌药物、接种物及操作过程的可靠性，确保整个检测系统处于受控状态。

4. 特定耐药机制筛查：通过特定的药物组合或筛选浓度，初步检测菌株是否携带如超广谱β-内酰胺酶、碳青霉烯酶、甲氧西林耐药等重要的耐药表型。

5. 接种物浓度验证：精确测定并调整用于药敏试验的菌悬液浓度，确保其符合标准要求，这是保证最低抑菌浓度结果准确的前提。

6. 培养基性能验证：对用于稀释法药敏试验的肉汤培养基进行无菌性、酸碱度及支持标准菌株生长能力的评估。

7. 抗菌药物溶液稳定性评估：对配制好的抗菌药物储存液及工作液进行稳定性测试，确保其在有效期内活性符合试验要求。

检测范围

1. 菌株范围：本检测适用于临床分离的常见需氧及兼性厌氧快速生长型细菌，主要包括但不限于肠杆菌目细菌、非发酵葡萄糖革兰氏阴性杆菌、葡萄球菌属、肠球菌属及链球菌属等。

2. 样本类型：检测对象为经纯培养分离鉴定的单一细菌菌落，可来源于血液、尿液、痰液、伤口分泌物、脑脊液等各类临床标本的分离物。

3. 药物范围：涵盖临床常用的各类抗菌药物，包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、大环内酯类、糖肽类、四环素类、磺胺类以及新型抗菌药物等。

4. 方法适用范围：主要适用于肉汤微量稀释法，其原理同样指导肉汤宏量稀释法与琼脂稀释法。检测范围不包含专性厌氧菌、分枝杆菌、真菌及苛养菌的特殊药敏试验。

5. 应用场景：适用于医院临床微生物实验室、疾病预防控制中心、第三方医学检验机构及抗菌药物临床研究，用于常规药敏报告、耐药监测、流行病学调查及新药评价。

检测方法/标准

1. 核心方法标准：本检测严格遵循临床与实验室标准协会发布的M24文件及其后续增补内容，作为方法学的根本依据。

2. 操作流程标准：具体操作流程符合临床与实验室标准协会M07文件（稀释法抗菌药物敏感性试验方法）的详细规定。

3. 结果解释标准：最低抑菌浓度值的临床解释严格采用临床与实验室标准协会M100文件（抗菌药物敏感性试验执行标准）中公布的最新折点。

4. 质量控制标准：质控菌株的选择、频率、允许范围等，遵循临床与实验室标准协会M100文件及M24文件中的质量控制章节。

5. 培养基与试剂标准：试验所用阳离子调节肉汤、琼脂等培养基，其配方与性能要求参考临床与实验室标准协会M07文件及相关美国临床实验室标准化协会标准。

6. 菌液制备标准：接种物的制备与浓度标准化方法，依据临床与实验室标准协会M07文件规定的直接菌落悬浮法或生长法。

检测设备

1. 自动化药敏系统：采用自动化肉汤微量稀释法药敏分析仪，可自动接种、孵育、判读最低抑菌浓度并生成报告，集成度高，通量大。

2. 手动微量稀释板：使用预置有梯度浓度抗菌药物的冻干或冷冻保存的微量稀释板，配合多通道移液器与接种器进行手动操作。

3. 菌液浓度测定设备：包括麦氏比浊仪，用于快速、准确地调整菌悬液至标准麦氏单位；或更精确的光度计，用于测定特定波长下的吸光度值以标定菌液浓度。

4. 标准孵育设备：恒温空气培养箱，温度控制精确，能维持在三十五摄氏度正负一摄氏度的标准孵育温度。

5. 样本处理设备：生物安全柜，为菌株接种、转移等操作提供无菌环境及人员保护；漩涡混合器，用于充分混匀菌液；精确移液器，覆盖不同体积范围。

6. 结果判读设备：反射光或透射光读取器，辅助观察微量稀释孔内的细菌生长情况；或由自动化系统集成的光学扫描与图像分析模块。

7. 数据管理系统：实验室信息管理系统，用于接收样本信息、传输检测结果、存储历史数据并与医院信息系统对接，实现报告电子化。

8. 试剂储存设备：超低温冰箱，用于长期储存抗菌药物标准品及质控菌株；普通冰箱，用于短期保存培养基及工作试剂。

9. 灭菌与清洁设备：高压蒸汽灭菌器，用于培养基、实验用具及废弃物的灭菌处理。

方法详述与质量控制

1. 菌悬液标准化制备：从纯培养平板上挑取数个形态一致的菌落，悬浮于无菌生理盐水或肉汤中，通过麦氏比浊法调整浊度至零点五麦氏标准，此浓度约相当于每毫升一亿五千万菌落形成单位。随后，使用肉汤培养基进行精确稀释，以获得最终接种浓度。

2. 抗菌药物稀释与加样：根据待测药物的性质，使用合适的溶剂溶解标准品，制备高浓度储存液并分装冻存。试验当日，将储存液用培养基进行系列倍比稀释，制备一系列浓度的药物工作液。在微量稀释板的各孔中加入不同浓度的药物工作液及培养基。

3. 接种与孵育：将标准化后的菌悬液接种至含药微孔及生长对照孔中，使每孔最终接种量达到特定浓度。接种完成后，盖上板盖，置于三十五摄氏度普通空气培养箱中孵育十六至二十小时。对于某些生长缓慢的细菌，需适当延长孵育时间。

4. 最低抑菌浓度判读：孵育结束后，将稀释板置于观察器上。肉眼观察各孔细菌生长情况。无肉眼可见细菌生长的最低药物浓度孔即为该药物的最低抑菌浓度。通常以生长对照孔生长良好、质控菌株结果在允许范围内作为试验有效的判读前提。

5. 全程质量控制体系：质量控制贯穿检测始终。每日或每批次试验必须包含标准质控菌株，其最低抑菌浓度结果必须在临床与实验室标准协会规定的允许范围内。新批次培养基、药物板或试剂投入使用前需进行性能验证。定期对仪器设备进行校准与维护。实验室人员需经过严格培训并定期考核。

6. 结果解释与报告：将测得的最低抑菌浓度值与临床与实验室标准协会M100文件中的临床折点进行比较，将细菌对该药物的敏感性判定为“敏感”、“中介”或“耐药”。报告需清晰列出药物名称、最低抑菌浓度值及敏感性类别，并附有相关备注。

注意事项与局限性

1. 适用范围限制：该方法主要针对快速生长的需氧及兼性厌氧菌。对于苛养菌、厌氧菌、分枝杆菌及真菌，需采用其他专用方法，不可直接套用。

2. 菌株纯度要求：待测菌株必须为纯培养物。混合培养物将导致结果无法解释或错误。接种前需仔细确认平板上的菌落形态一致性。

3. 接种物浓度关键性：接种物浓度是影响最低抑菌浓度结果的最关键因素之一。浓度过高可能导致假性耐药，浓度过低可能导致假性敏感。必须严格按照标准流程进行浊度调整与稀释。

4. 孵育条件标准化：孵育时间与温度必须严格控制。过早读板可能导致最低抑菌浓度值偏高；温度不当会影响细菌生长速率，从而影响结果。

5. 药物稳定性影响：某些抗菌药物在溶液中或储存过程中可能不稳定。需遵循文件建议配制和使用药物，注意储存条件与有效期，避免使用降解的药物导致结果不准确。

6. 结果解释的临床背景：最低抑菌浓度和敏感类别是重要的实验室数据，但最终的治疗决策需结合感染部位、患者病理生理状况、药物药代动力学/药效学特性等临床信息由医生综合判断。

7. 特殊耐药表型：对于某些耐药机制，仅靠稀释法可能无法准确检测或需要特殊指示药物。例如，诱导型耐药、异质性耐药等，可能需要补充其他表型或基因型检测方法。

8. 人员操作规范性：尽管有自动化设备辅助，但许多环节仍依赖人工操作。人员的熟练度、规范性和对细节的关注直接影响结果的可靠性。持续培训与内部监督至关重要。

检测技术研究院

📝 报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

⏳ 检测周期：7~15工作日，可加急。

🏅 资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS/ISO资质报告。

📏 标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

🔬 非标测试：支持定制化试验方案。

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发布于：山东省